Năm 1524, sát thủ Ezio đã gác kiếm ẩn thân tại miền quê Tuscany cùng vợ và con gái. Nhưng đến một ngày, vì lời khẩn cầu từ nữ s&aa cute;t thủ trẻ Shao Jun, Ezio buộc phải tái xuất nhằm giúp cô cứu lấy tổ chức.